亜鉛は200種類を超える金属酵素を構成しており核酸、タンパク質の合成に関わる元素です。 特に細胞の複製には不可欠であり哺乳類においては成長期の急性的な亜鉛欠乏により、皮膚や毛髪の障害、発育遅延などが報告されています。従って、亜鉛の適切な供給は身体の健全な発達に重要です。医学、栄養学的研究において、近年、一層注目されている微量元素です。

本法は5-Br-PAPSと亜鉛とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し亜鉛濃度を定量するものです。 タンパク質や低分子代謝物に配位している亜鉛を試薬中の変性剤により解離させ、5Br-PAPSと配位結合させることで亜鉛キレート錯体を形成させます。この亜鉛キレート錯体は波長560nm付近に吸収極大を有しており、この吸光度を測定することで亜鉛濃度を求めることができます。

◯ 本キットでダイレクトに定量可能な試料 例：血清、血漿、尿 キット中の変性剤が亜鉛をタンパクから解離させ、発色させます。特に前処理は必要ありません。 ※EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください ※蓄尿をサンプルとする場合は塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2 ~ 3になるよう調整してください。 ◯ 酸抽出の必要な試料 例：細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料 サンプルを低pHにすることでタンパクから亜鉛を解離させ、上清をアッセイ検体とします。 ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。 ・遊離鉄 ・タンパク結合（配位）亜鉛（ Protein-Zn2+ 、 e.g.アルブミン、メタロチオネイン） ・その他、配位結合性亜鉛 ※EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。 ※有機亜鉛やヘム亜鉛などは酸分解を行って下さい。 ◯ マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料 例：EEDTAなどの強固なキレート剤、有機亜鉛（ -C-Zn-C- 単結合している場合）、環状配位子内包亜鉛 （Zn-ポルフィリン等）を含む試料 酸抽出では解離しない化学種を測定する場合や強力な亜鉛キレート剤などの妨害物質を含む試料の測定には必要です。 ※各分解法で有機物を分解後、pH2 ~ 3に調整し、定容した試料をアッセイ検体としてください。

(1) ) DIW、標準液、アッセイ検体 12 μlを96 well plateにアプライ (2) RA 230 μlをwell添加 (3) 室温で5分間インキュベート (4) 主波長560nm(副波長700 nm)の吸光度を測定 (5) 以下の計算式より鉄濃度を求める

(1) 本キットによる管理血清の測定 図1. 亜鉛濃度が既知である管理血清の測定結果 (2) 希釈直線性 図2. 標準試料希釈直線性　　　　

Kamei S et al. Zinc Deficiency via a Splice Switch in Zinc Importer ZIP2/SLC39A2 Causes Cystic Fibrosis-Associated MUC5AC Hypersecretion in Airway Epithelial Cells. EBioMedicine. 2017 Dec 25. Tanaka K et al. Thioredoxin-albumin fusion protein prevents copper enhanced zinc-induced neurotoxicity via its antioxidative activity. Int J Pharm. 2017 Nov. PubMed PMID: 29122608. Ratanayotha A et al. Molecular and functional characterization of the voltage-gated proton channel in zebrafish neutrophils. Physiol Rep. 2017 Aug. PubMed PMID: 28774948. Orino K. Inhibitory effect of transferrin on serum zinc measurement. Biometals. 2017 Aug. PubMed PMID: 28677078. Narukawa M et al. Participation of the peripheral taste system in aging-dependent changes in taste sensitivity. Neuroscience. 2017 Jul 4. PubMed PMID: 28687314. Mochizuki A et al. Cytocompatibility of magnesium and AZ31 alloy with three types of cell lines using a direct in vitro method. J Mater Sci Mater Med. 2016 Sep.PubMed PMID: 27568216. Hattori Y et al. Metallothionein MT2A A-5G Polymorphism as a Risk Factor for Chronic Kidney Disease and Diabetes: Cross-Sectional and Cohort Studies. Toxicol Sci. 2016 Jul. PubMed PMID: 27122239. Oboshi M et al. Attenuation of hypertension and renal damage in renovascular hypertensive rats by iron restriction. Hypertens Res. 2016 Dec. PubMed PMID: 27439494. Suzuki T et al. Dietary zinc deficiency induces oxidative stress and promotes tumor necrosis factor-α- and interleukin-1β-induced RANKL expression in rat bone. J Clin Biochem Nutr. 2016 Mar. PubMed PMID: 27013778. Furukawa Y et al. Conformational Disorder of the Most Immature Cu, Zn-Superoxide Dismutase Leading to Amyotrophic Lateral Sclerosis. J Biol Chem. 2016 Feb. PubMed PMID: 26694608. Kuribayashi T et al. Simple differentiation of sake (Japanese alcoholic beverage) based on trace inorganic components using colorimetric methods. J Biosci Bioeng. 2016 Jan. PubMed PMID: 26077711. Suzuki T et al. Zinc Deficiency Increases Serum Concentrations of Parathyroid Hormone through a Decrease in Serum Calcium and Induces Bone Fragility in Rats. J Nutr Sci Vitaminol (Tokyo). 2015. PubMed PMID: 26639846. Suzuki T et al. Dietary zinc supplementation increased TNFα and IL1β-induced RANKL expression, resulting in a decrease in bone mineral density in rats. J Clin Biochem Nutr. 2016 Jan. PubMed PMID: 26798197. Hanagata N et al. Calcium ions rescue human lung epithelial cells from the toxicity of zinc oxide nano particles. J Toxicol Sci. 2015. PubMed PMID: 26354379. Fujihara J et al. Distribution and toxicity evaluation of ZnO dispersion nanoparticles in single intravenously exposed mice. J Med Invest. 2015. PubMed PMID: 25817283. Okada A et al. Analysis of the binding of bovine and human fibrinogen to ferritin: evidence that fibrinogen is a common ferritin-binding protein in mammals. Biometals. 2015 Aug. PubMed PMID: 25860295. Mizuno D et al. Protective activity of carnosine and anserine against zinc-induced neurotoxicity: a possible treatment for vascular dementia. Metallomics. 2015 Aug. PubMed PMID: 25846004. Ohtsuka H et al. Sexual development of Schizosaccharomyces pombe is induced by zinc or iron limitation through Ecl1 family genes. Mol Genet Genomics. 2015 Feb. PubMed PMID: 25204792. Nakanishi K et al. Synthesis of amino-functionalized mesoporous silica sheets and their application for metal ion capture. Journal of Asian Ceramic Societies. 2014 Nov. Mochizuki A et al. Study on the blood compatibility and biodegradation properties of magnesium alloys. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2015 Feb. PubMed PMID: 25492190. Sakurai Y et al. A primary role for disulfide formation in the productive folding of prokaryotic Cu,Zn-superoxide dismutase. J Biol Chem. 2014 Jul. PubMed PMID: 24917671. Minami A et al. Improvement of depression-like behavior and memory impairment with the ethanol extract of Pleurotus eryngii in ovariectomized rats. Biol Pharm Bull. 2013. PubMed PMID: 24292057. Homma K et al. SOD1 as a molecular switch for initiating the homeostatic ER stress response under zinc deficiency. Mol Cell. 2013 Oct. PubMed PMID: 24076220. Isobe N et al. TEMPO-oxidized cellulose hydrogel as a high-capacity and reusable heavy metal ion adsorbent. J Hazard Mater. 2013 Sep. PubMed PMID: 23747479. Chou J et al. The therapeutic effect on bone mineral formation from biomimetic zinc containing tricalcium phosphate (ZnTCP) in zinc-deficient osteoporotic mice. PLoS One. 2013 Aug. PubMed PMID: 23967249. Zhuang F et al. Synergic Toxicity of Solid Particles and Released Zinc from Zinc Oxide Nanoparticles to Human Lung Epithelial Cells. Nano Biomedicine. 2012.

岩渕拓也：技術情報協会（編）　微量金属分析とその前処理技術,p192-200(2015) 岩渕拓也、鈴木裕子：技術情報協会（編）　最先端バイオマーカーを用いた診断薬/診断装置開発と薬事対応(2015)

Makino, T., Saito,M., Horiguchi, D. and Kina, K. :A highly sensitive colorimetric determination of serum zinc using water-soluble pyridylazo dye. Clin. Chim. Acta, 120, 127－135（1982）

準備中